第七章 DNA序列分析
§1 Sanger双脱氧链终止法
§2 DNA片段序列测定的策略

第一节 Sanger双脱氧链终止法 (chain-terminator method)
1977年Sanger充分利用DNA复制的生物学特性,设计了一种通过DNA复制来识别4种碱基的方法,进行DNA序列测定,即双脱氧链终止法。
Sanger法获得诺贝尔化学奖。
 一、Sanger双脱氧链终止法原理
  在模板指导下，DNA聚合酶不断将dNTP加到引物的3’-OH末端’使引物延长’合成出新的互补的DNA链，如果加入双脱氧三磷酸核苷(ddNTP),由于双脱氧核糖的3’位置上缺少一个羟基，故不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，即形成一种全部具有相同5’-引物端和以ddNMP残基为3’端结尾的一系列长短不一片段的混合物。由于双脱氧核苷酸在每个DNA分子中掺入的位置不同，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳区分长度差一个核苷酸单链DNA，从而读取DNA核苷酸序列。