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酶组织化学(Enzyme Histochemistry)
     
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    第二章  酶组织化学
               酶组织化学(Enzyme  Histochemistry)是利用组织细胞内酶具有催化某种反应的特性来检测酶活性。一般是用冻结或固定的切片,再一定条件下(具有酶的底物等)全酶进行催化作用,产生一种可见产物,沉淀在酶所在的部位,最终通过显微镜对酶的活性进行定位或定量研究。

    ※   特点: ① 在原位检测
                        ② 检测酶的活性而不是酶分子本身
    酶的分类:按生物化学分类——六大类
         ①  氧化还原酶               ② 转移酶  
         ③水解酶                         ④ 裂解酶 
         ⑤异构酶                         ⑥连接酶
    常用检测方法
    1.沉淀法
      ①金属沉淀法:Ca++—Co++法;Pb法
      ②偶联法:重氮盐法
                ③ 靛原法
               ④四唑盐法

    2.后偶联法Post-coupling(ACP)
    3.合成法
    4.底物膜法  设计半透膜       切片/ 孵育法 ★★★  影响酶组化实验的关键因素
    ①  酶活性的保存
    a)固定:酶组化的固定剂有教严格的限制,不
                      同的酶适用不同的固定剂
         △   抑制酶活性和细胞化学成分活性的重金
                属盐Hg、Cr、Pb等不能用做固定剂。
         △慎用醛
                            

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