第二章 酶组织化学
酶组织化学(Enzyme Histochemistry)是利用组织细胞内酶具有催化某种反应的特性来检测酶活性。一般是用冻结或固定的切片,再一定条件下(具有酶的底物等)全酶进行催化作用,产生一种可见产物,沉淀在酶所在的部位,最终通过显微镜对酶的活性进行定位或定量研究。
※ 特点: ① 在原位检测
② 检测酶的活性而不是酶分子本身
酶的分类:按生物化学分类——六大类
① 氧化还原酶 ② 转移酶
③水解酶 ④ 裂解酶
⑤异构酶 ⑥连接酶
常用检测方法
1.沉淀法
①金属沉淀法:Ca++—Co++法;Pb法
②偶联法:重氮盐法
③ 靛原法
④四唑盐法
2.后偶联法Post-coupling(ACP)
3.合成法
4.底物膜法 设计半透膜 切片/ 孵育法 ★★★ 影响酶组化实验的关键因素
① 酶活性的保存
a)固定:酶组化的固定剂有教严格的限制,不
同的酶适用不同的固定剂
△ 抑制酶活性和细胞化学成分活性的重金
属盐Hg、Cr、Pb等不能用做固定剂。
△慎用醛




