基因表达系列分析(SAGE)是通过快速和详细分析成千上万个EST(express sequenced tags)来寻找出表达丰富度不同的SAGE标签序列。再次访法中,通过限制性酶切可以产生非常短的cDNA(10-14bp)标签,并通过PCR扩增和连接,随后对连接题进行测序。SAGE大大简化和加快了3’端表达序列标签的收集和测序。同DD一样,SAGE是一个“开放”的系统,可以发现新的未知的序列。在进行标本的比较之前,SAGE在cDNA的产生和处理上需要较多个步骤。由于SAGE是一个依赖DNA测序的基因计量方法,它对基因表达的测定比DD更加量化。由于需要进行大量的测序反应,所以费用因素使大多数研究机构对其广泛应用的主要限制。
SAGE — Serial Analysis of Gene Expression
1. Create cDNA sequences from poly−A+ RNA with biotinylated ends
2. Cut at every CATG (Nla3 site)
3. Isolate 3’−most fragments using streptavidin beads
4. Chop off the CATG plus next 10 nucleotides (SAGE tags)
5. Sequence the tags




